角膜、结膜上细微的糜烂以及小缺损，仅凭肉眼难以发现，需要借助检查工具与手段，外部眼科染料是临床上简单常用的方法，以辅助诊断角膜、结膜、泪腺系统和鼻泪系统疾病。荧光素钠染色和孟加拉玫瑰红染色是目前宠物临床上较为多见的眼科染料。其他眼科染料还包括台盼蓝、丽丝胺绿、阿尔新蓝、亚甲蓝等。
荧光素钠染色
荧光素钠是氧杂蒽基团的一种水溶性二元酸，染色可用于诊断疑似角膜上皮缺损、角膜糜烂或溃疡的眼病，以及鼻泪管阻塞测试、泪膜破裂时间测量等。
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检查角膜溃疡
荧光素具有高度疏脂性和亲水性。因此，当用于眼睛表面时，其不会与含脂质的上皮细胞膜(结膜和角膜)保持接触，而是黏附于任何暴露的基质上并由其吸收。由于接触亲水性物质，故荧光素还会将细胞间隙染色，因此有助于检查角膜糜烂，得出荧光素钠染色阴性、阳性结果（不能定量角膜损伤深度）。同时由于后弹力层的疏水性，荧光素不会将后弹力层染色。
图源：《伴侣动物眼科学》
在自发性慢性角膜上皮缺损症染色中，因为角膜上皮与基质间存在间隙，使荧光素可以进入角膜上皮层下，将基质染色，因此染色面积往往会比预期大，出现荧光色素浸润。
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泪膜破裂时间(TBUT)
荧光素可用于泪膜破裂时间(TBUT)的测量来评估泪膜的稳定性，通过测量荧光素染料和泪膜从角膜表面分离所需的时间，TBUT可以间接评估泪膜的黏蛋白和/或脂质层，指征由于泪液中的脂质及黏液蛋白缺失所造成的干眼症。
检测方法：在患宠眼中滴入一滴荧光染剂，保持眼睑张开状态，观察角膜多久出现第一处干燥的黑点，连续测试三次求平均时间。
正常动物泪膜破裂时间：
犬：20秒
猫：17秒
脂质层
泪液脂质层是由睑板腺分泌的脂质构成的薄层，具有防止泪液水样层蒸发，稳定泪液，使其在角膜上均匀分布的作用。
黏蛋白层
黏蛋白层由免疫球蛋白、尿素、盐类、葡萄糖、白细胞、细胞碎片和酶构成。黏蛋白层在角膜上制造了一个光滑曲面，有润滑角膜和结膜表面,减少泪液水样层和角膜上皮间的剪切力，抑制细菌附着，防止干燥的作用。
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荧光素引流试验（Jones染液试验）
通过确定鼻泪系统的解剖通畅性和生理通畅性，来评估泪液引流的整个机制，相较于鼻泪系统冲洗，荧光素引流试验不会改变鼻泪系统的自然状态，犬猫正常流出的时间为5分钟左右。
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检测房水渗出（Seidel试验）
Seidel试验用于检验是否存在角膜或巩膜全层缺损引起的房水或玻璃体腔液体渗漏，是配合荧光素钠试剂检查角膜穿孔的一种方法（穿孔非常明显时，可不必做此检查），滴入荧光试剂后，若随着穿孔部位漏出的房水形成水流状，即Seidel征（+），可明确出现了角膜穿孔，注意关注“溪流”的流速。如果存在眼内容物流出的风险，不应进行该试验。
荧光素染色随着角膜穿孔处房水渗漏形成水流状
孟加拉玫瑰红染色
孟加拉玫瑰红（四氯四碘荧光素）是一种深粉色染料，可同时与荧光素使用，不受影响。主要对没有黏液层保护的角膜细胞进行染色，可对泪膜评估，同时还可用于证明可能不会被荧光素染色的浅层角膜糜烂或早期溃疡，如点状角膜炎、疱疹性角膜炎和早期真菌性角膜炎。
参考文献
[1] 陈武, 付源, 夏楠译. 伴侣动物眼科学[M]. 湖北:科学技术出版社, 2018.
[2] 董轶, 曹悦, 史利亚译. 兽医眼科学[M]. 沈阳:辽宁科学技术出版社, 2024.
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